Jaar: derde jaar afdeling: chemie optie: biochemie
Cursus/labo/oef: biochemie datum: 09/04/2000

1)

Doel

Het doel van deze proef is het omslagpunt van verschillende aminozuren te leren detecteren aan de hand van titraties met behulp van een buret + meer informatie omtrent aminozuren te proberen achterhalen.

2)	Principe - uitvoering

Aminozuren zijn amofteer, ze kunnen zowel een postieve als een negatieve lading bezitten.
Of ze hebben zowel een zuur karakter als een basisch karakter. Hun lading en het zuur of base hangt af van de pH van het milieu waarin zij zich bevinden.
Aminozuren hebben een carboxylgroep en een aminogroep.
Ze hebben dus twee ioniseerbare zwakke groepen nl. –COOH/-COO^- en –NH₃⁺/-NH₂.
Ondanks het feit dat het twee zwakke zuren zijn, is de carboxylgroep t.o.v. de aminogroep wel een duizendmaal sterker. De vorm COOH/NH₂ kan niet voorkomen. Ofwel is één van beide groepen geïoniseerd ofwel zijn beide het.


De respectievelijke pK_a-waarden voor de carboxylgroep en de aminogroep zijn 2 en 10. Bij een pH lager dan zijn pK_a zal een zuur hoofdzakelijk geprotoneerd zijn. Indien nu de pH geleidelijk wordt verhoogd , dan zal de carboxylgroep zijn proton verliezen nog voor de NH₂ wordt gevormd.
Bij een hoge pH is dan de vorm COO^- /NH₂ aanwezig.

De netto lading van aminozuren hangt dus af van de omgevende oplossing.
De pH waarbij de netto lading = 0, is de pI-waarde of het isoelektrisch punt. Bij deze pH zullen de aminozuren niet migreren in een elektrisch veld.

De pI-waarde voor aminozuren met slechts twee geladen groepen is:

pI = pK1+pK2
2
Berekening van een aminozuur met meer dan twee dissocieerbare groepen is iets ingewikkelder.
We moeten nu ook rekening houden met de R-groep. We zullen dit doen aan de hand van de dissociatieconstanten.

We zullen eerst een aminozuuroplossing van 0,1M bereiden
Daarna gaan we 10 ml aminozuuroplossing 0,1M in een beker van 100 ml pipetteren. Nu gaaan we met behulp van een gekalibreerde pH-meter de pH van de oplossing bepalen.

We vullen de buret met een 0,1N HCl-oplossing nadat we de buret enkele malen hebben voorgespoeld.
Daarna zullen we met die HCl-oplossing pipetteren en we bepalen de pH.

We voegen nu verdere hoeveelheden HCl-oplossingen toe en we bepalen telkens de pH.

Nadat we de elektrode hebben gewassen gaan we nu aan de hand van een nieuwe oplossing van ons aminozuuroplossing 0,1M gaan titreren met 0,1N NaOH-oplossing.
We voegen nu verdere hoeveelheden NaOH-oplossingen toe en we bepalen telkens de pH.

Wij hebben de metingen uitgevoerd op slechts één aminozuur nl: het aminozuur Leucine en dit samen met een 1ml formol die we hebben toegevoegd.

Formaldehyde reageert met aminogroepen (-NH₂) met vorming van monomethylol en dimethylol componenten.

-NH₂ + HCHO -NH(CH₂OH)
-NH(CH₂OH) + HCHO...








Nog geen opmerkingen of toevoegingen op dit document geplaatst.
Wil jij een bericht plaatsen dan kan dat door op "post message" te klikken.